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本制品是用于模板DNA或RNA的LAMP扩增反应冻干微球制剂，包含了热启动Bst4.3 DNA/RNA聚合酶、解旋因子Uver、dNTP、Mg²⁺、反应缓冲、HNB变色指示剂、其它稳定剂，单粒扩增体系为25μL。

本制品中的特制的HNB染料在反应起始前与Mg²⁺结合产生深紫罗兰色，随着LAMP反应的进行，产生的PPi（无机焦磷酸盐）结合体系中的Mg²⁺，使得HNB显示出淡绿色。

• 本制品包含热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>95%，在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；
  
• 本制品包含独特的解旋因子Uver，因此，允许在不使用F3/B3引物的情况下进行LAMP扩增（easy LAMP），并允许FIP/BIP的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提升。
  
• Bst4.3 DNA/RNA聚合酶在用于LAMP扩增时的推荐反应温度为65～70℃，最佳反应温度为70℃。由于Uver的反应温度为70℃，因此在进行eLAMP扩增时，反应温度设置为70℃，大幅降低引物Dimer的形成，提高扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分；
  
• 本制品在1×浓度情况下，对如下试剂的耐受度：
  

  试剂	耐受浓度
  Tris-HCl(pH8.0)	≤10mM
  NaOH	≤1mM
  Tween20%	≤1%
  EDTA(pH8.0)	≤20μM
  肝素	≤0.5 IU/mL

• HNB变色指示剂是还原状态下的染料，任何强氧化剂（H2O2、次氯酸钠等）均会破坏HNB变色指示剂的结构，从而直接导致试剂变为深蓝绿色。
  
• 防止气溶胶污染，尽可能进行分区操作。

• 10×LAMP Primer Mix制备：
  本试剂既可以用于标准LAMP扩增，也可以用于eLAMP扩增。
  
  • 10×标准LAMP Primer Mix：
    FIP/BIP=16μM each；LF/LB=4μM each；F3/B3=2μM each
    
  • 10×eLAMP Primer Mix：
    FIP/BIP=8μM each；LF/LB=4μM each
    
    • eLAMP（easy LAMP）为去除F3/B3引物的方法，为Bst4.3专用的使用策略，对于大多数引物组，在Uver的加持下，扩增速度几乎不受影响。如引物扩增效率低，可提高FIP/BIP浓度到12～16μM。
• 配制LAMP反应体系：
  

  成分	用量
  HotStart DNA/RNA HNB LAMP Bead	1粒
  10×LAMP Primer Mix	2.5μL
  模板DNA/RNA	X μL
  ddH2O	至25μL

• LAMP扩增程序：
  反应体系配好后，按下表条件反应20～30min。
  

  标准LAMP扩增	eLAMP扩增
  65～70℃均可	70℃反应

• 结果判定：反应完毕后观察颜色，紫色为阴性，绿色为阳性扩增。